БЕЛЫШЕВА, ВОРОНЦОВА: «Натамицин и другие — консерванты без опасности»

Новая методика идентификации натамицина в покрытиях, пищевой продукции

Дубильные вещества, фитонциды, бензойная и другие органические кислоты — природные консерванты, всегда присутствующие в составе свежих продуктов растительного или животного происхождения. Химические консерванты помогают сохранять свежесть на многие месяцы, но могут оказаться небезвредными для людей. Жесткий контроль их состава и концентрации — важнейшая задача. И применяемые для этого методы постоянно совершенствуются. Заведующая лабораторией химии пищевых продуктов НПЦГ Людмила БЕЛЫШЕВА и ведущий химик Ольга ВОРОНЦОВА рассказали ПРОДУКТ.BY о существующих методиках идентификации и определения концентраций консервантов в продуктах, а также о новом методе детекции и количественной оценке натамицина в сырных покрытиях. 

Действующим санитарным законодательством предусмотрено, что химические консерванты должны использоваться в минимальных концентрациях, достаточных для достижения технологического эффекта.

Хорошим антисептическим эффектом обладают органические кислоты. Однако в качестве химических консервантов часто используют их соли, как более технологичные. Вместо бензойной кислоты (Е210), например, берут бензоаты натрия, калия, кальция. Но в силу того, что консервирующим эффектом обладает исходное вещество, нормируется именно его концентрация в продукте. По словам специалистов, пересчет содержания солей на кислоту очень прост. Он делается исходя из соотношения молекулярных масс веществ.

«Аналитику неважно, какая именно соль применялась. Он всегда определяет концентрацию основного действующего вещества», — обращают внимание эксперты и добавляют, что это относится ко всем пищевым добавкам, которые применяются в виде солей.

Натамицин (пимарицин, дельвоцид) представляет другую группу консервантов. Этот фунгицидный противогрибковый препарат образуют бактерии Streptomyces natalensis (Е235). Он используется для поверхностной обработки сырокопченых, полукопченых, сухих и созревающих колбас, твердых, полутвердых и полумягких сыров.

Фактическое содержание натамицина в сырах определяется по ГОСТ ISO 9233-2–2017 «Сыры, сырные корки и плавленые сыры. Определение содержания натамицина. Часть 2. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для сыров, сырных корок и плавленых сыров». Метод позволяет фиксировать массовую долю натамицина на уровне от 0,5 мг/кг в сырах, сырных корках и плавленых сырах, а также массу натамицина на единицу площади поверхности более 0,03 мг/дм².

Вопрос контроля Е235 в колбасах пока не имеет такого однозначного ответа. Возможное решение — проведение валидации ГОСТ ISO 9233-2–2017. Однако до недавнего времени существовала еще одна нерешенная проблема — определение содержания натамицина в покрытиях, пищевой продукции. Новый метод, предложенный специалистами НПЦГ, дает ответы на многие сложные вопросы.

При разработке методики основное внимание уделялось стадиям пробоподготовки и собственно хроматографическому анализу.

Подготовка пробы

В качестве экстрагентов натамицина рассматривались органические растворители (метанол, этанол, ацетонитрил) и, учитывая водную основу полимерного покрытия, их водные растворы. Однако при их соприкосновении с навеской испытуемого образца происходит образование липкой полимерной пленки, что не позволяет применять их в качестве основного экстрагента. При этом натамицин растворим в воде, причем показатель увеличивается при высоком рН.

____________________________

Основными техническими нормативными правовыми актами (ТНПА), определяющими требования безопасности и безвредности для человека, являются:

• технический регламент Таможенного союза ТР ТС 029/2012 «Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств», принят Решением Совета Евразийской экономической комиссии от 20 июля 2012 г. № 58;
• Санитарные нормы и правила «Требования к пищевым добавкам, ароматизаторам и технологическим вспомогательным средствам» и Гигиенический норматив «Показатели безопасности и безвредности для человека применения пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств», утвержденные постановлением Министерства здравоохранения Республики Беларусь от 12.12.2012 № 195.

____________________________

Поэтому в коническую колбу объемом 100 см³ помещали навеску образца массой до 1 г и добавляли 50 см³ ацетатного буферного раствора. Все тщательно перемешивали и затем медленно вносили 50 см³ метанола.

Экстрагирование натамицина проводили в ультразвуковой бане в течение 15 мин при температуре 40 °С с дальнейшим термостатированием до комнатной температуры в темном месте в течение 30 мин. Затем экстракт выдерживали 30 мин при температуре минус 20 °С. За это время мешающие анализу вещества выпадали в осадок. Надосадочную жидкость отфильтровывали сначала через бумажный фильтр, потом — через мембранный — с размером пор 0,45 мкм. Далее растворы хроматографировали.

Хроматографический анализ проводили на жидкостном хроматографе Shimadzu LC-20 Prominence (Япония), оснащенном диодно-матричным детектором с использованием хроматографической колонки Agilent, Eclipse Plus C 18 (США) размером 250×4,6 мм с сорбентом, размер зерна которого 5 мкм. Идентификация хроматографических пиков проводилась по времени удерживания в колонке и спектру, характерному для натамицина.

Для построения градуировочного графика использовали метанольные растворы натамицина в диапазоне концентраций от 2,0 до 10,0 мкг/см3. Градуировочный график, характеризующий зависимость площади пика от концентрации натамицина, носит линейный характер. Коэффициент корреляции — 0,999 %.

На рис. 1 представлены хроматограммы стандартного раствора натамицина с концентрацией 5,0 мкг/ см³ и натамицина, выделенного из полимерного покрытия, с концентрацией 266,1 мг/кг.

Рисунок 1. Хроматограммы: а — градуировочного раствора натамицина, концентрация 5,0 мкг/см³; б — натамицина, выделенного из полимерного покрытия, концентрация 266,1

Данным методом исследовано шесть образцов полимерных покрытий с различным содержанием натамицина. Полученные данные сравнивались со значениями, указанными в технических документах (ТД) на исследуемую продукцию. Результаты представлены в табл. 1. Видно, что обнаруженное содержание натамицина отличается от значений, приведенных в ТД на продукт. Полученные результаты подтверждают, что методика пригодна для идентификации и количественного определения натамицина в покрытиях для сыра.

Таблица 1. Результаты определения натамицина в полимерных покрытиях для сыра, полученные методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

____________________________

В лаборатории химии пищевых продуктов республиканского унитарного предприятия

«Научно-практический центр гигиены» (НПЦГ) проводятся испытания пищевой продукции на содержание натамицина, бензойной, сорбиновой кислот и других пищевых добавок. Специалисты лаборатории обучают методам анализа, оказывают помощь в разработке и освоении современных методик исследований, валидации, расчета неопределенности измерений, проводят стажировку на рабочих местах. На базе НПЦГ функционирует Международный образовательный центр «На Академической», в рамках которого осуществляется реализация образовательных программ повышения квалификации, стажировок, обучающих курсов в виде тематических семинаров и вебинаров с выдачей документов установленного образца (подробная информация — на сайтах www.certificate.by, www.rspch.by).

Источник: ПРОДУКТ.BY